在HPLC分析中，我们通常使用小粒径色谱柱（如≤5μm）、较低的洗脱流速、改变流动相梯度的方式来实现对洗脱时间非常接近的两个组分的分离。当HPLC的流速提升至半制备和制备的流速水平时，由于液相色谱耐压的限制，小粒径的色谱柱已经不能适用，而是改用大粒径的色谱柱，但这也带来一个问题，两个紧密洗脱的组分可能分离不开，使得要收集它们的“纯组分”将变得很困难。

　　循环制备色谱法是一种能够有效分离紧密洗脱组分的技术，它将未分离的目标组分峰反复循环回流至色谱柱内继续分离，通过“延长”色谱柱长度实现组分的最终分离并收集。当在传统制备色谱上采用如降低洗脱流速或改变洗脱梯度依然不能得到良好的分离效果时，循环制备色谱法将会是一种很好的解决方案。

KNAUER 循环制备液相色谱

　　如图1所示，(+/-) -α-生育酚，当使用5μm粒径色谱柱（红色）时，两个组分可以实现较好的基线分离；而使用10μm粒径色谱柱（黑色）的分离度严重下降，这时候想要收集两种α-生育酚的纯净组分是不可能的，但通过峰循环的方式，在经过第四次峰循环之后，两个组分已经实现了基线分离，这时我们就可以收集它们各自的纯净组分。

图1：(+/-) -α-生育酚的循环色谱分离

　　传统的制备色谱在目标组分从色谱柱中洗脱后，直接在馏分收集器或收集阀处进行组分的收集（如图2-上），当目标峰分离不佳时，我们通过收集阀的切换，开启循环模式（图2-下），洗脱后的目标峰通过泵被重新循环色谱柱中进行分离，重复这个过程，直至目标峰被完全分离。

图2：循环制备色谱的原理