循环制备色谱法是一种有趣的可分离两种紧密洗脱组分的技术，它通过增加色谱柱的长度而实现峰的分离。当其他优化方法如降低流量或改变溶剂梯度依然不能改变目标峰的分离效果时，它可以作为一种非常有效替代方法而发挥作用。

在之前的文章中（循环制备液相色谱 —— 解决未分离混合峰组的分离难题）我们介绍了一种循环制备色谱方案来解决共洗脱峰的分离，该方案采用了一根色谱柱，通过闭环循环的方式将峰组反复循环至色谱柱内进行分离，每次循环时，峰组都会经过泵。

图1：闭环循环制备色谱的原理

该闭环循环方式的优点是溶剂消耗将很低，在峰被收集之前，不会产生新的溶剂消耗，仅靠管路内部溶剂即可实现循环和分离。但它的主要缺点是系统的死体积较大，每次循环时，管线、泵头或混合器都将增加死体积，这将导致组分在离开色谱柱后会有少量组分重新混合。因此，每循环一次都将显著增加峰展宽。

图2：闭环循环色谱法分离莱苞迪甙A和甜菊苷

今天我们将介绍一种改进的循环制备方法，它的优点是有更好的峰分离度。该方法将由两个相同的色谱柱来实现循环分离。通过柱切换阀，从柱1上洗脱后的目标峰被重新注入柱2，组分将不再经过泵。

图3：改进的循环制备法的流路

通过柱选择阀的切换，洗脱的目标峰将沿着两个通道移动：从柱1到UV 1，到柱2，从柱2到UV 1，到柱1（见图4）。每次切换后，峰都可以离开色谱柱进入第二个UV检测器（UV 2），然后通过收集器收集目标峰。

（A：柱1→UV 1→柱2；B：柱2→UV 1→柱1）

我们采用这种改进的循环方法对图2示例中的莱苞迪甙A和甜菊苷的混合溶液进行了分离，分离效果见图5。蓝色谱图为UV1的循环检测信号，红色谱图为UV2的监测信号，从UV1的监测信号中，我们可以看出，组分总过6次经过色谱柱分离后，已基本实现了良好的分离，其分离效果较图2的闭环循环提高明显。两个组分循环6次后，将终止循环，通过阀切换，组分进入UV2进行检测，并通过软件的自动峰识别对两个组分进行自动收集。

图5：改进的循环制备法的分离莱苞迪甙A和甜菊苷（洗脱流速：3.5 ml/min；流动相：70%水+30%乙腈；UV波长210nm；样品浓度：0.2mg/ml）

改进的循环色谱方法，显著提高了目标峰的分辨率。双检测器的配置，可以在一次运行中能实时监测并支持方法开发的过程。通过软件上的自动峰识别功能，就可以自动识别峰和自动收集，使得循环制备方法更加简便和重复。

图8：LUMTCH Calmflow循环制备系统