高分辨质谱的高质量精度是测定潜在分子式的前提，但并不足以确定分子式。在之前的几期的文章中，我们介绍了谱图准确度在质谱上鉴定化合物分子式的作用，今天我们以高分辨Orbitrap为例，简单描述谱图准确度对于化合物分子式鉴定的帮助。

亚麻荠籽粕中的植物化学成分的鉴定

使用Thermo公司的高分辨LTQ Orbitrap Discovery对脱脂亚麻荠籽的甲醇提取物进行分析，图1（上）为提取物的UV 280nm色谱图，图1（下）为TIC图。

图1：样品UV 280nm光谱图（上）及总离子流图TIC（下）

　　1. 一级MS的分子式分析

　　在MassWorks软件中打开LC/MS数据，对TIC图中峰的[M-H]-离子进行sCLIPS分析，结果如图2所示。

图2：脱脂亚麻荠籽的甲醇提取物的[M-H]-离子的分子式鉴定结果

　　从图2的结果可以看出，谱图准确度Spectral Accuracy对19个峰的分子式的排序几乎都在前2位，其中13个峰的分子式排序都是第1名；而 Xcalibur 软件的排序（Formula Hits）对这些峰的分子式的识别并不理想，仅有3个峰的分子式排在第一位，一些峰的排序甚至排序在几十位。这表明了谱图准确度对化合物分子式鉴定的巨大优势，可以让分子式的鉴别更为准确和可信。

　　2. 多级MS的碎片分析

　　峰Rt = 21.7 min的[M-H]离子，m/z = 506，HCD得到的二级质谱图中得到了m/z 442.1、248.1和96.96（见图3）。其中m/z = 96.96为SO4-离子，仅由硫甙类化合物产生。在植物化学数据库中，只有一种化合物与这个分子式相匹配：糖甙（9-甲基-亚砜基-壬基-硫代葡萄糖苷）。据文献报道，这种化合物存在于亚麻荠中。

图3：Rt = 21.7 min峰的二级质谱图

　　峰Rt = 13.9 min的[M-H]离子，m/z = 609，HCD得到的二级质谱图中得到了离子m/z 462和301（见图4）。通过MassWorks的sCLIPS分析得到的化学式与文献中报道的在亚麻荠中发现的黄酮醇芦丁（槲皮素-3 -o -（6′ -o -鼠李糖）-糖苷）的化学式相对应。m/z 462离子是鼠李糖末端丢失的一个糖单元，m/z 301离子是黄酮醇苷元槲皮素。这个结果也被芦丁标准品的保留时间和MS-MS二级谱图得到了验证。

图4：Rt =13.9 min峰的二级质谱图

　　采用上述的鉴定方式，全部化合物的最终鉴定结果如图5所示。

图5：亚麻荠籽的甲醇提取物的鉴定结果

　　3. 结论

　　通过MassWorks的sCLIPS功能对Orbitrap MS生成的精确质量数据进行了分析，为亚麻荠种子的提取物中提供了分子式鉴定。先前在亚麻荠的文献中仅描述了四种化合物。通过多级MS碎片分析的解释初步鉴定了另外的5种黄酮类化合物，其它的9种黄酮类化合物仅通过谱图准确度鉴定了分子式。

　　该方法显示了高分辨质谱的精确质量数与谱图准确度的结合，在准确预测未知物分子式时的巨大前景，同时，结合多级MS的碎片分析，可以进一步为结构式的鉴定提供依据。

　　关于MassWorks 软件

　　MassWorks软件是由 Cerno Bioscience 公司开发的一款革命性的MS数据定性分析软件，能帮助我们在低分辨率的四极杆GC/MS、LC/MS直接测定化合物的精确质量，并通过独有的谱图准确度概念确定出准确的分子式。MassWorks软件同样适用于高分率质谱（TOF、Orbitrap）的定性分析。

　　关于绿绵科技

　　绿绵科技是Cerno Bioscience公司在中国区的总代理商，负责Cerno公司旗下的MassWorks、GC/ID 等产品市场推广、销售、售前/售后技术支持、应用支持。

　　若您想了解获取 MassWorks 产品的更多信息或应用，欢迎致电绿绵科技！