从药用植物中提取天然活性成分已得到广泛应用，提取产物通常为植物精油，洋甘菊蓝油便是其中一种，内含多种化合物。通常仅有少数组分决定提取物整体药效；母菊薁是洋甘菊油中核心药用活性成分。本文介绍采用制备型高效液相色谱（HPLC），从洋甘菊蓝油中分离纯化母菊薁的整套方法。

1. 引言

洋甘菊具备抗炎、镇痛、镇静等药理活性，药效源于花中各类酚类物质。母菊素是其中一种酚类前体，在蒸馏加工过程中会转化生成母菊薁 [1,2]；母菊薁赋予洋甘菊油标志性的深蓝色。已有研究证实，母菊薁单体本身兼具抗炎与抗氧化活性 [3]。 目前已有多种 HPLC 分析方法用于不同来源洋甘菊样品检测，也有大量提取、蒸馏工艺相关报道，但尚无公开文献报道采用制备型 HPLC 纯化母菊薁的完整方法[2]。本应用方案以市售洋甘菊蓝油为原料，通过制备型反相高效液相色谱获得高纯母菊薁。

2. 实验部分

• 样品前处理

洋甘菊蓝油以甲醇 - 水（体积比 90:10）稀释，过滤去除不溶性杂质。

• 样品配制方法

• 分析方法定性确认

将洋甘菊油样品与母菊薁对照品色谱图比对，目标物母菊薁出峰保留时间为 7.6 min（图 1）；采集 190–400 nm 全波段紫外光谱，样品主峰与对照品光谱曲线几乎完全重合，证实 7.6 min 色谱峰为母菊薁（图 2）。 本分析方法可实现母菊薁色谱峰与前后相邻杂质峰基线完全分离（图 1），因此可直接将该方法放大至半制备色谱规模

。

图2：母菊薁标品（红色）和洋甘菊油样品（蓝色）的紫外吸收光谱图比较

• 半制备色谱（内径 20 mm 色谱柱）工艺摸索

色谱柱柱长与分析柱一致，内径由 4.6 mm 扩大至 20 mm，填料粒径由 5 μm 升级为 10 μm，流速提升至 25 mL/min；分别进样不同体积样品考察上样负荷。 过载实验结果显示：单次进样 1 mL 时，母菊薁与其余杂质可实现良好分离（图 3）；最终纯化实验采用 2 mL 进样量，通过馏分收集阀截取母菊薁对应色谱峰区间（图 4 灰色区域）。

图4：20 mm 半制备柱 2 mL 进样色谱图，灰色区域为目标馏分收集窗口

将收集馏分重新用分析色谱检测，并与母菊薁对照品比对（图 5），图谱仅出现母菊薁单一色谱峰，证明馏分纯化效果理想。 对 2 mL 进样所得馏分定量检测：母菊薁回收率达 101.80%，样品稀释倍数约 10 倍（表 1）；回收率略高于 100% 由多步检测误差传递导致。

图5：半制备收集馏分分析验证色谱图（将图 4 中的馏分图谱以蓝色叠加显示，母菊薁标准品溶液（浓度 0.75 毫克 / 毫升）以红色叠加显示，均在分析色谱柱上完成测定。）

• 工业放大制备色谱（内径 50 mm 色谱柱）

半制备纯化方案验证可行后，进一步放大至内径 50 mm 制备柱；为降低溶剂消耗、缩短运行周期，色谱柱长度由 250 mm 缩短至 150 mm，流速提升至 150 mL/min，单次进样体积调整为 10 mL（图 6 灰色区域为收集馏分）。

图6：50 mm 放大制备柱 10 mL 进样色谱图，灰色区域为馏分收集区间（进样体积 10 毫升；x 代表母菊薁色谱峰；C18 色谱柱规格：50×150 毫米，填料粒径 10 微米；流动相流速 150 毫升 / 分钟。）

将放大工艺收集馏分进行分析色谱验证（图 7），图谱仅检出母菊薁，无其他可检测杂质；10 mL 进样条件下母菊薁回收率为 82.20%（表 1）。

图7：50 mm 放大制备柱收集馏分纯度验证色谱图（在分析色谱柱下，叠加图 6 所得馏分图谱与 0.75 mg/mL 母菊薁标准品图谱）

表1： 2 mL、10 mL 进样馏分中母菊薁定量结果

3. 结论

本研究建立了一套反相制备液相色谱方法，可从洋甘菊蓝油中纯化母菊薁。

• 半制备规模（内径 20 mm 色谱柱）可获得近 100% 纯度母菊薁，回收率超 100%，微小偏差源于多步定量检测误差；通过保留时间匹配、全波段紫外光谱比对，完成馏分中母菊薁定性确证。
• 为提升单次处理通量，将工艺放大至内径 50 mm 制备柱，填料粒径与半制备柱保持一致；仅更换 250 mL 泵头即可将输液泵升级至大流速工况。10 mL 大体积进样下母菊薁回收率 82%；若拓宽馏分收集窗口可提升回收率，但会引入杂质，降低产物纯度。
• 本方案完成了反相制备液相纯化母菊薁方法开发；后续可开发正相制备液相方案 —— 工业生产中正相色谱应用更广，部分样品溶解性更优，且洗脱溶剂更易旋蒸去除。

4. 材料与方法

表 2 分析型液相系统配置

[1] Srivastava, J. K., Gupta, S. Extraction, characterization, stability and biological activity of flavonoids isolated from chamomile flowers. Mol Cell Pharmacol 1(3), 138 (2009).

[2] Haghi, G., Hatami, A., Safaei, A., Mehran, M. Analysis of phenolic compounds in Matricaria chamomilla and its extracts by UPLC-UV. Res Pharm Sci 9(1), 31-7 (2014).

[3] Salihovic, M., Sapcanin, A., Spirtovic-Halilovic, S., Zavrsnik, D. DFT structural analysis of chamazulene. Bull Chem Technol Bosnia Herzegovina 46, 27–32 (2016).