SPE应用07:全自动OnlineSPE-LC/MSMS法快速测定尿样中的碱性毒品
关键词：安非他明，麻黄碱，碱性毒品，尿样，在线固相萃取，液质联用
时间：2016-11-22 15:01:53
全自动OnlineSPE-LC/MSMS法快速测定尿样中的碱性毒品
1. PromoChrom Technologies Ltd. 2. 北京绿绵科技有限公司
安非他明、麻黄碱具有有多种生理活性和药理疗效，如镇静、镇痛、镇咳等，还具有一定的毒性和麻醉性，连续服用易产生习惯成瘾问题。近年来，吸毒和药物滥用对人们的生活和社会安定构成了极大威胁，成为备受关注的社会问题，因此，开发出准确、快速、简便的检测尿样等体液中毒品类物质的分析方法具有重要意义。
本文将提供一种使用PromoChrom公司的SPE-04在线固相萃取仪结合液质联用技术直接、快速检测尿样中的9种碱性毒品的方法。样品经在线固相萃取净化后直接进入液质联用仪中分析，样品制备和仪器分析全部自动完成。
该方法也可直接转移至PromoChrom公司的离线固相萃取平台（SPE-01、SPE-03），萃取完成后，手动转移样品至液质联用仪进行分析。
1、仪器
高效液相色谱仪： Agilent 1260 Infinity LC。
质谱检测器：Agilent 6460A MSD。
在线固相萃取仪：SPE-04 Online SPE（带衍生功能），PromoChrom Technologies。
2、方法适用的目标物
目标分析物为amphetamine（安非他明）, metamphetamine（甲基苯丙胺），MDA（4,5－亚甲基二氧基苯丙胺），MDMA（3,4－亚甲基二氧甲基苯丙胺），MDEA（甲基二乙醇胺）, phentermine（芬特明），phenylpropanolamine（去甲麻黄碱），ephedrine（麻黄碱）和pseudoephedrine（伪麻黄碱）。
3、分析方法
取1mL尿液样品于样品瓶中（准确移取），直接用于固相萃取。
3.1 在线固相萃取条件
固相萃取柱： Bond Elut Plexa PCX，30 mg/3 mL，PromoChrom Technologies；（将方法略为调整后，也可以使用其它强阳离子交换柱）。
淋洗溶剂：溶剂1为甲醇；溶剂2为2%甲酸的内标溶液（含MDA-D5, MDMA-D5, MDEA-D6, amphetamine-D6, metaamphetamine-D9 各为500 ng/mL. 使用当天配制）；溶剂3 为水；溶剂4为甲醇+氨水（90：10），氨水浓度为28-30%，使用当天配制）；衍生试剂1为2%甲酸水溶液。
SPE-04在线固相萃取方法设置：
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行号
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操作
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体积
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流速
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注释
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0
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Elute C1 with 1
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2.5
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5
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用甲醇预淋洗2.5毫升, 流速5毫升/分。
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1
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Rinse vial with 2
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1.7
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5
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将1.7毫升内标溶液混入样品，然后加回到SPE柱。同时甲酸使分析物带正电荷，便于被阳离子交换柱吸附。
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2
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Rinse vial with 1
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1.5
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5
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用甲醇清洗样品瓶，洗液加入SPE柱。
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3
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Elute C1 with 4
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0.2
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5
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将淋洗溶剂切换到溶剂4。
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4
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Collect
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1.0
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5
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继续用溶剂4淋洗，收集1.0毫升组分。溶剂4里的氨水使碱性化合物的正电荷消除，便于洗脱。
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5
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Load fraction to heater
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0.4
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0
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将0.6毫升组分和0.4毫升衍生试剂1（2%甲酸溶液）混合后导入衍生室。混合后可以中和组分的碱性并使组分溶液的组成和LC的起始流动相更接近，使HPLC分析的峰形和分离更好。
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6
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Inject reactant
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0.5
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5
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将组分引入进样阀的样品环。环体积为20微升。
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7
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Start LC
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1
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0
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触发LC-MS开始分析样品。
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3.2 液质联用条件：
色谱柱：Poroshell 120 EC-C18， 3X50mm，2.7um，Agilent；
流动相：A为含0.1%甲酸的甲醇，B为0.1%甲酸水溶液；
流速：0.8 mL/min；
梯度淋洗的条件如下表：
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Time（min）
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0.0
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1.5
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3.5
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3.6
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6.6
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6.7
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B%
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15
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15
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30
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90
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90
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15
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分析停止时间为7分，平衡时间为2分钟。
3.3 离线固相萃取方法
离线固相萃取仪：SPE-01或 SPE-04或 SPE-03，PromoChrom Technologies；
固相萃取柱： Bond Elut Plexa PCX，30 mg/3 mL，PromoChrom Technologies；（将方法略为调整后，也可以使用其它强阳离子交换柱）。
淋洗溶剂：溶剂1为甲醇，溶剂2为2%甲酸的内标溶液（含MDA-D5, MDMA-D5, MDEA-D6, amphetamine-D6, metaamphetamine-D9 各为500 ng/mL. 使用当天配制），溶剂3 为水，溶剂4为乙酸乙酯+乙醇+氨水（50：50：15，氨水浓度为28-30%，使用当天配制）。
样品：样品瓶中的尿样体积为0.7毫升（准确移取）。
离线固相萃取仪器方法设置：
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行号
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操作
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体积
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流速
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注释
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0
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Elute 1
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5
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2.5
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用甲醇预淋洗2.5毫升, 流速5毫升/分。
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1
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Rinse 2
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5
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1.7
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将1.7毫升内标溶液混入样品，然后加回到SPE柱。在这一步，甲酸使碱性化合物带正电荷，便于被阳离子交换柱吸附。
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2
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Rinse 1
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5
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1.5
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用甲醇清洗样品瓶，洗液加入SPE柱。
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3
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Elute 4
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5
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0.2
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将淋洗溶剂切换到溶剂4。
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4
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Collect1
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5
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1.5
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继续用溶剂4淋洗，收集1.5毫升组分。溶剂4里的氨水使碱性化合物的正电荷消除，便于洗脱。
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收集的组分在45度下用氮吹仪浓缩近干。用1.0 mL HPLC的起始流动相定容。在本方法中，起始流动相为甲醇+水+甲酸（15：85：0.1）。溶剂4 中的乙醇在浓缩过程中可以把组分里的水带走，不会照成浓缩后有水滴残存。
关于绿绵科技
北京绿绵科技有限公司(简称：绿绵科技)以体现客户服务高价值为宗旨，以专业精神和技能为广大实验室分析工作者提供样品前处理、样品制备及分析、实验数据分析和管理的全面解决方案，致力于协助客户提高分析检测的效率和水平。主要代理产品：LabOS实验室运营系统、Lumtech半制备/制备液相色谱、MassWorks准确质量测定及分子式识别、New Objective纳喷离子源、GE生命科学设备、凝胶净化前处理、在线固相萃取、电喷雾离子迁移谱、全柱成像毛细管等电聚焦电泳仪、实验室氮气氢气空气发生器、Agilent中端气相液相、生物耗材、Buffer缓冲液。
北京绿绵科技有限公司维修服务通过ISO9001质量管理体系认证，用户可以得到标准化的安装、调试、维护、保养，负责PromoChrom Technologies Ltd产品在全中国的技术服务和销售。
电话：010-82676061/2/3/4/5/6/7 传真：010-82676068 E-mail：info@lumtech.com.cn
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