本应用描述了ISOLUTE®  NH₂固相萃取柱萃取人尿中乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）和硫酸二乙酯（EtS）。

（乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）和硫酸二乙酯（EtS））

Ferrara等近发表出版物，使用ISOLUTE NH₂固相萃取柱，处理制备人体尿液中酒精的生物标志物的方法。本方法每年可以成功处理6000个样品。

据报道，尿液浓度为500ng/ml，方法重复性RSD%<20%。低检测定量限为100ng/mL，这种方法主要的优点是不需要蒸发步骤而直接进行液相色谱-质谱/质谱分析。

样品处理流程
板子：ISOLUTE NH2 100mg/2mL柱，货号p/n:470-0010-A
样品预处理：100uL尿中加入HCl（6M，50uL）和1mL乙腈，离心
活化：2mL甲醇活化每个柱子
平衡：2mL水平衡各个柱子，然后含有0.2%（v/v）乙酸的乙腈2mL平衡
上样：1mL/min的速度上样总体积2.15mL
干扰物洗脱：用1mL己烷洗干扰物，正压下干燥柱子10分钟。
洗脱分析物：10mM的甲酸盐/甲酸铵d (pH 3, 2 x 750 µL)洗脱分析物。需要不干模式。

（液相参数，Agilent 1200 HPLC）

(质谱参数，API4000串接液质谱)

（分离谱图）

 （留存的样品A-F）

本研究优化参数并提出了建议，初方法的开发在Biotage 美国应用实验室，然后办法转移ARUP奥雅纳，进一步研究方法的性能，与真正的病人以前的样本进行验证的裁判方法。正交测量的结果表明，可以提供相同的诊断数值。

黄慧等发表的《酒精滥用的生物学标志物》就综述了酒精生物学标志物。酒精生物学标志物有两类：间接生物学标志物和直接生物学标志物。 间接生物学标志物反映酒精对人体器官、组织或机体生化反应的毒性作用，直接生物学标志物为酒精代谢的产物，尤其是那些存在时间较长、非氧化性的代谢物。作为酒精生物学标志物需要具备一定的准确性，即足够的灵敏度和特异性。
常见的间接生物学标志物包括r-谷氨酰转肽酶（GGT）、谷丙转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶(AST)、糖缺失性转铁蛋白(CDT)、红细胞平均体积(MCV)。常用的直接生物学标志物包括葡萄糖醛酸苷（EtG）、硫酸乙酯（EtS）、磷脂酰乙醇（PEth）、脂肪酸乙酯（FAEEs）。由于酒精生物学标志物的无创性和便捷性，用途甚广，在常规临床工作、急诊室、戒酒康复机构、酒后驾驶、肝移植酒精摄入的评估、胎儿酒精综合征等方面均有应用；为酒精相关问题的预防、诊断、跨学科合作打开了新视角。

酒后驾车是一个性的交通安全问题。我国每年因交通事故死亡中约25%-30%与酒后驾车有关。由于乙醇在体内代谢较快，一般饮酒后6-8h体内已检测不到乙醇。对于疑酒后驾车肇事后逃逸者，在一定时间后体内检测不到乙醇，因此需要寻找新的途径证明肇事者是否为酒后驾车。
乙醇进入人体后，有一部分乙醇与尿嘧啶核苷-5‵-二磷-葡萄糖醛酸结合成乙基葡萄糖醛酸苷（ethyl glucuronide，EtG）由于其比原体乙醇的半衰期长，当血液中乙醇浓度低于检测限时，体内仍可在一定时间内检出EtG。因此血液中EtG的检测及评价越来越为人们所重视 ，特别是酒后驾车肇事逃逸案件中，抽血与事故发生时间隔过长，血液中往往测不出乙醇成分，但可以检测血液中EtG。

订货信息：

货号：470-0010-A ISOLUTE NH2 100mg/1 mL 数量：100个
货号：PPM-48 Biotage正压歧管，48孔 ，数量：1个
货号：C103198 TurboVap LV 100/120V，无架子 ，数量：1个
货号：C103199 TurboVap LV 220/240V ，无架子 ，数量：1个

（PPM-48 Biotage正压歧管，48孔）

高级附件：

大流量氮气发生器Maestro或EURUS（法德赛），用于液质联用仪持续供气，大于99%的纯度，分子筛长寿面技术降低仪器维护费用。

文献：Donata Favretto & Alessandro Nalesso & Giampietro Frison & Guido Viel & Pietro Traldi & Santo Davide Ferrara, Int. J. Legal Med. (2010) 124:161–164

来源于：Application Note AN818.V.1 ©2014 Biotage ： A No-Drydown SPE Method for Biomarkers of Alcohol Consumption in Human Urine

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